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磁珠法细胞RNA提取试剂盒

分类:细胞RNA提取目录:RE05

产品特性:

高通量
方便
环境安全
稳定
自动化适用

本试剂盒用于提取贴壁培养细胞、细胞悬液、血液白细胞中核糖核酸(RNA)。试剂盒由高效吸附核酸的超顺磁性纳米微球和安全环保的提取试剂体系组成:经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强、洗脱更容易;操作步骤简单,操作时间短,室温提取过程,适合于快速核酸提取的磁珠自动化过程。

操作流程(示意图):


医脉赛(EmerTher)磁珠法细胞RNA提取试剂盒在提取细胞RNA的应用实例见下。



目录号规格适用机型
RE0500120份瓶装,适用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE05002100份瓶装,适用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自动移液工作站
RE0596B96份医脉赛、圆点、奥盛、天隆、天根等品牌多种纯化机型
RE0560C60份Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取仪
RE0596D96份Thermo Scientific KingFisher Flex纯化系统

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【手工提取步骤】
1. 裂解细胞(根据细胞来源不同,选择相应的实验步骤):
a. 单层培养细胞:吸去直径3.5cm培养皿贴壁细胞(约106个细胞)培养基,加入1ml细胞消化液裂解细胞2min(加量可根据培养板面积决定,使细胞消化液可以覆盖培养板),用移液器吸打,并转移细胞悬液至2ml离心管中;
b. 细胞悬液:加入等体积细胞消化液裂解细胞(每105 -107个细胞加1ml 细胞消化液),用移液器吸打,并转移细胞悬液至1.5ml离心管中;
c. 血液处理:直接取新鲜的血液,加入1倍体积市售红细胞裂解液(不包含在本试剂盒),混匀后室温放置1min,1000rpm 离心5min。弃上清,收集白细胞沉淀。每1-5ml血液收集的白细胞沉淀中加入200-1000µl细胞消化液,用移液器吸打,并转移细胞悬液至1.5ml离心管中;
2. 取100µl上述细胞消化液样本于另一离心管,加入100µl 灭菌水,600µl核酸结合液,置于旋转混和仪,温和混匀5min;
3. 加入30µl磁珠悬浮液,置于旋转混和仪,温和混匀5min,用磁分离架吸附磁珠,弃上清;
4. 加入600µl洗涤液I洗涤磁珠5min,吸附磁珠,弃上清;
5. 加入600µl洗涤液II洗涤磁珠2min,吸附磁珠,弃上清;
6. 加入600µl洗涤液III洗涤磁珠2min,吸附磁珠,弃上清;
7. 再次加入600µl洗涤液III洗涤磁珠2min;
8. 吸附磁珠,弃上清,并吸除残留液体;
9. 静置3-5min,去除乙醇残留;
10. 加入100µl洗脱液,温和混合洗脱5min;
11. 磁场吸附磁珠,回收含核酸洗脱液至另一RNase-free离心管内,用于后续检测或保存于-20°C冰箱;长期保存请置于-70°C或加入RNase Inhibitor。

【自动化提取步骤(以32通道为例)】
1. RE0596B预装板设置(96孔深孔板,样品量200µl,16通量)

2. 从试剂盒中取出预分装96深孔板,轻甩96深孔板使试剂及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去铝箔封口膜,避免96深孔板振动,防止液体溅出(注意:室温低于15°C时,请在开封使用前将96孔板置于37°C预热20min,以避免沉淀析出);
3. 取200µl细胞消化后的样本液,加入在第1列、第7列溶液中;
4. 放置2个8道磁套;选择附表所列的自动化提取程序,开始提取;客户可按所使用的核酸自动提取仪适当调整程序,如果有问题,请联系技术支持;
5. 转移第6列、第12列中含核酸的洗脱液至RNase-free离心管内,用于后续检测或-20°C储存。

次序列号程序混合时间(sec.)磁吸时间(sec.)等待时间(sec.)体积(μl)混合速度温度(℃)
11裂解3000080037
22吸磁30200600室温
31结合30030080037
42洗涤1300200600室温
53洗涤2120200600室温
64洗涤3120300600室温
75洗涤412030120600室温
86洗脱30060010050
94移去磁珠3000600室温


A. 细胞RNA得率低
1、取样前样品没有充分混匀。细胞样品取样前适当将样品摇匀。
2、磁珠加样量不足。请在吸取磁珠前将核酸提取磁珠悬液充分混匀。
3、与磁珠结合不充分。在RNA与磁珠结合过程中请温和摇匀,确保RNA与磁珠充分结合。
4、样品没有按照要求保存导致RNA降解。

B. 获得的RNA条带弥散,RNA片段断裂
1、样品冷藏时间过久,没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜及正确保藏的样品。
2、操作过程过于剧烈,RNA被机械打断。请严格按照说明书操作。

C. RNA样品不纯,抑制或者干扰后续试验
1、样本裂解结合后没有进行磁珠转移更换离心管,导致管壁黏附的杂质污染最终提取物。
2、磁珠没有完全干燥,有乙醇残留。最后一次洗涤后尽量吸净离心管内的液体。
3、加入洗脱液之前将磁珠静置5min左右,确保乙醇完全挥发。